夹竹桃天蛾质型多角体病毒在Sf9细胞系中的增殖研究

摘要

新型夹竹桃天蛾质型多角体病毒(Daphnis nerii cypovirus-23,DnCPV-23)可杀灭多种天蛾科昆虫,具备开发新型昆虫病毒杀虫剂的潜力.目前,主要利用夹竹桃天蛾(Daphnis nerii)对该病毒进行研究,DnCPV-23在细胞中的复制情况尚不清楚.本研究将DnCPV-23病毒粒子接种至草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞系Sf9中,分析该病毒在细胞中的复制情况.将病毒感染的细胞置于27°C条件下进行培养,利用光学显微镜观察病毒对Sf9细胞状态的影响;分别提取第1、3和7 d感染细胞的RNA,以其为模板进行反转录获得cDNA,利用qRT-PCR分析DnCPV-23 RNA水平;利用qRT-PCR方法分别对细胞培养上清液和病毒连续传代的细胞进行研究.结果显示,DnCPV-23能较好地适应Sf9细胞且成功感染Sf9细胞,并产生细胞病变效应(cytopathic effect,CPE);在细胞培养上清液中能够检测到病毒片段;病毒能够在Sf9细胞上进行传代.该研究为深入研究DnCPV-23入侵、转录机制、评价病毒毒力提供了良好的细胞模型,同时为新型天蛾科害虫病毒杀虫剂的开发提供一定的参考和依据.