利用流式细胞术鉴定新疆野杏染色体倍性和DNA含量

摘要

分布在我国新疆伊犁河谷的野杏(Armeniaca vulgaris)是第三纪暖温带阔叶林的孑遗群落,其分布区域广阔,具有庞大的实生群体和丰富的遗传多样性.为探索适合杏属植物的流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测体系,以快速、准确的对杏属植物的倍性和DNA含量进行检测,本研究选取野杏不同供试材料(幼叶,老叶),通过不同保存方式(新鲜,冷藏,液氮保存)处理,并以紫花苜蓿(Medicago sativa)为外标,利用杏流式细胞术检测体系对10种常用的解离液进行筛选与优化,并检测了野杏的细胞倍性和DNA含量.结果表明,新鲜幼嫩的叶片,使用经优化的MgSO4解离液与Lysis解离液(LB01)的混合液(MgSO4-LB01)制各样品进行检测,其变异系数(coefficient of variation,CV)最低,上样速率达150events/μL.随着试材冷藏时间的增加,样品CV值随之增加.冷藏4d以内的幼嫩叶片CV值在5％以内,老叶及液氮保存的叶片制备细胞核悬浮液CV值较高,呈现出分辨率差的峰,背景碎片较多.本研究检测得出供试新疆野杏均为二倍体,DNA含量范围为288～321 Mb/C.新鲜或冷藏4d之内的幼嫩杏叶片是进行流式细胞术检测的理想材料,经优化的MgSO4-LB01混合液是最适杏的解离液,利用流式细胞术可以快速准确地检测杏属植物的倍性及DNA含量.本研究结果为杏属植物基因组学和遗传进化研究提供基础数据.