结合条件对羊抗兔抗体连接到细菌磁小体的影响

摘要

用羊抗兔抗体进行抗体连接到细菌磁小体(BMPs)实验,以探讨结合条件对抗体连接效率(以每毫克BMPs上连接抗体的微克数表示,单位为μg/mg)的影响.实验表明,冷冻干燥后的BMPs的抗体连接效率降低36%～55%;在液氮中(-196℃)预处理的抗体连接效率显著高于在-70℃和-20℃预处理的.室温(15℃)下反应18 h的抗体连接效率最高,为64.06μg/mg,明显高于其它温度和连接时间的.反应体系中,BMPs用量由5 mg降到0.1 mg,抗体用量由10μg增加到300μg时,抗体连接效率逐渐上升,当BMPs用量为0.1 mg,抗体用量为300μg时,抗体连接效率达762.37 μg/mg.PBS、HEPES、Tris-HCl、MOPS、VBS以及磷酸盐等溶液可用于抗体连接到BMPs体系中,在通常使用的缓冲液pH和浓度下,几种溶液的抗体连接效率变化范围为46.28±0.58～90.83±1.64μg/mg;并且不同的溶液有相应的使抗体连接效率达到最高时的pH和溶液浓度,当HEPES的pH为3.5,浓度为20 mmol/L;Na3PO4的pH为5.6,浓度为5 mmol/L时,抗体连接效率分别为108.01和76.78μg/mg.对连接到BMPs上的抗体进行SDS-PAGE定性检测结果表明,抗体连接到了BMPs的膜上.