猫白介素-18基因的克隆、序列分析及其表达

摘要

用猫白介素18(interleukin,IL-18)基因特异性引物对刀豆蛋白(ConA)刺激后猫外周血单核细胞(PBMCf)总RNA进行了RT-PCR扩增,并将扩增产物纯化后克隆入pMD18-T中进行核苷酸序列测定.结果该基因全长579 bp,编码192个氨基酸(GenBank登录号:DQ100372).在推导的猫IL-18氨基酸序列中,无信号肽序列和潜在的N-联糖基化位点,但存在4个Cys残基.与不同物种IL-18相比,猫IL-18与犬、羊、牛和猪IL-18核苷酸序列有较高的同源性,分别为89.8%、88.6%、88.4%和88.1%,但与小鼠和鸡IL-18有明显的种属差异.将目的基因片段进一步亚克隆到大肠杆菌(Escherichiacoli)表达载体pET28a中构建了重组质粒pETIL-18,转化大肠杆菌BL21(DE3),并用IPTG诱导.结果重组菌菌体裂解物经SDS-PAGE电泳可检测到分子量为27.5 kD的重组目的蛋白.经凝胶薄层扫描,目的蛋白表达量可占菌体蛋白的13.6%.