灰飞虱脂肪酶LsLPS的原核表达及Ni-NTA纯化

摘要

灰飞虱是危害中国水稻的3种主要稻飞虱之一。脂肪酶是脂肪代谢的关键酶,在昆虫发育、繁殖等生理活动中具有重要作用。为了深入研究脂肪酶(LsLPS)在灰飞虱生长发育中的功能,本研究克隆了LsLPS基因ORF序列,并进行了原核表达和His标签融合蛋白的纯化。结果显示,灰飞虱LsLPS开放阅读框长1293 bp,可翻译成430个氨基酸,含有信号肽序列和PF00151结构域。LsLPS连接到原核表达载体pET28a(+)-SUMO、pCold I后在表达菌株BL21(DE3)中主要以包涵体形式表达,连接到pET43.1a(+)后可在表达菌株BL21(DE3)中可溶性表达。采用pH 8.0、含20 mmol/L咪唑的磷酸缓冲液作为平衡液,Ni-NTA纯化LsLPS-pET43.1a(+)融合蛋白的纯度和产量相对较高。