耻垢分枝杆菌蛋白酶体辅助因子 A 的敲除和功能探讨

摘要

目的：用同源重组方法构建耻垢分枝杆菌 MC2155蛋白酶体辅助因子 A(proteasome accessory factor A,PafA)基因敲除菌株,初步探究 PafA 基因的缺失对耻垢分枝杆菌的生长活力及药物敏感性的影响。方法对耻垢分枝杆菌基因组中 PafA 两侧序列分别进行扩增,连接载体及目的片段构建自杀载体,电击转入耻垢分枝杆菌中,与基因组中的 PafA 进行同源交换,通过蓝白斑筛选出基因敲除菌株。对敲除菌株与野生菌株每隔3 h 测定其正常条件、厌氧条件下及加不同浓度异烟肼、利福平和乙胺丁醇条件下菌液的吸光度(A580)值,比较其生长活力,连续2 d,绘制生长曲线。结果通过同源重组方法成功得到了耻垢分枝杆菌的 PafA 基因敲除株,不同药物浓度及生长条件下两者的生长曲线呈“S”形,两者之间的生长速度未见明显差别。结论 PafA 虽然是原核细胞类泛素-蛋白酶体系统中的重要组成部分,但它的缺失并未引起显著的菌株生长活力和药物敏感性的变化,提示 PafA 的主要功能可能不在于此,菌株另外还有代偿的途径,PafA 基因功能并不是影响耻垢分枝杆菌生长及药物作用效果的唯一因素,对它的功能研究需要更加深入。