隐匿性乙型肝炎病毒S基因的克隆及其表达载体的构建

摘要

目的 构建克隆载体,分析隐匿性乙型肝炎病毒S基因的突变情况,构建其原核融合蛋白表达载体.方法 采用分子克隆技术,通过PCR扩增获得隐匿型HBV S基因,与质粒载体PUC18进行体外重组,亚克隆构建原核表达载体pThiohis B-HBV S基因重组体.结果 从64例HBsAg阴性样本中检出2例HBV-DNA阳性样本,即隐匿型HBV感染患者;克隆载体与原核表达载体均构建成功,序列分析没有发现S基因突变.结论 采用实时荧光定量PCR能检测低拷贝数的隐匿性HBV感染患者,定量检测重组体中的HBV-DNA,可以鉴定阳性重组体,并可直观地显示克隆增殖情况;成功构建了HBV S基因的克隆载体及融合蛋白表达载体.