肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体及其Ⅰ型受体单克隆抗体联合体内外抗肿瘤作用

摘要

目的建立高效表达肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体（tumor necrosis factor related apoptosis-inducing ligand,TRAIL）单克隆抗体和TRAIL蛋白的方法 ,并验证抗体TR1-419与TRAIL的体内外联合抗肿瘤作用。方法利用Expi293蛋白表达系统表达抗体,采用Protein G进行抗体蛋白的纯化。利用原核表达系统表达SUMO-Strep-TRAIL蛋白并通过Ni2+柱及Strep两步亲和层析获得高纯度的TRAIL蛋白。流式细胞术检测抗体与肿瘤细胞表面TRAIL-R1的特异性结合能力。采用MTT法验证制备的TRAIL联合TR1-419单抗蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性。通过Western blot初步检测TRAIL联合TR1419抗体体外杀伤肿瘤的机制。建立裸鼠肿瘤模型,验证TRAIL联合TR1-419体内抗肿瘤作用。结果成功建立了Expi293抗体蛋白高效表达系统及TRAIL蛋白原核表达系统。TR1-419单抗特异性结合表达TRAIL-R1的HeLa细胞;TRAIL显示抗肿瘤作用。TRAIL联合TR1419作用于HeLa细胞,明显提高TRAIL杀伤肿瘤细胞的活性,同时激活Caspase8,启动凋亡信号转导通路。体内实验证明了TR1-419可增强TRAIL的抑制肿瘤生长作用。结论通过建立高效表达方法制备TR1-419抗体及TRAIL蛋白,并验证TR1-419可通过活化Caspase-8提高TRAIL在体内外抗肿瘤作用,为抗肿瘤免疫治疗提供新策略。