β-淀粉样蛋白对原代培养大鼠海马神经细胞钙稳态和线粒体线粒体通透性转运孔道的影响

摘要

目的研究β-淀粉样蛋白（β-amyloid）对原代培养的大鼠脑海马神经细胞内钙稳态和线粒体通透性转运孔（mitochortrialpermebility transition pore,MPTP）的影响,探讨其神经毒性作用的机制。方法原代培养8 d后的Wistar大鼠脑海马神经细胞,用老化的Aβ25-35对其进行1,10和20μmol/L剂量的染毒,培养24和48 h后观察海马神经细胞形态、游离钙浓度、Ca2+-ATP酶活性、线粒体膜电位,应用Western blot方法分析MPTP组成蛋白表达情况。结果随着Aβ25-35剂量的增加和染毒时间的延长,可以观察到原代培养的海马神经细胞呈现出弥漫性肿胀、开始变形、出现空泡、胞体边缘模糊的形态变化;原代培养海马神经细胞内的游离钙离子的浓度也呈逐渐上升趋势,其中Aβ25-3520μmol/L组在24 h和48 h时,细胞内钙离子浓度分别为（31.04±4.16）和（32.80±0.43）,均显著高于对照组（20.95±4.04）和（22.23±0.49）（P＜0.05）;Ca2+ATP酶活性随着染毒剂量和染毒时间增加明显降低（P＜0.05）,其中Aβ25-3520μmol/L组在24 h和48 h时,细胞内Ca2+-ATP酶活性为（2.14±0.01）和（1.10±0.05）U/mgprol,均显著低于对照组（5.17±0.08）和（4.57±0.06）（P＜0.05）;线粒体膜电位Aβ25-3520μmol/L组在24 h和48 h时,细胞内线粒体膜电位分别为（20.34±7.05）和（19.05±6.15）,均显著低于对照组（38.47±0.72）和（40.07±1.26）（P＜0.05）;有明显剂量反应关系;MPTP孔道蛋白的WB结果显示蛋白表达量随着染毒剂量增加而增加。结论 Aβ25-35通过破坏细胞的钙稳态激活MPTP孔道影响线粒体功能从而发挥神经毒性作用。