旁分泌在非小细胞肺癌辐射耐受能力传递中的作用研究

摘要

目的通过观察辐射抗性非小细胞肺癌（NSCLC）H460R细胞分泌物对亲本H460细胞辐射敏感性的影响,探讨旁分泌在NSCLC辐射耐受能力传递中的作用及可能机制。方法将H460细胞接种培养后,分为对照组、条件培养基组、照射组和照射联合条件培养基组。采用～（137）Csγ射线一次性照射,剂量率为1.02 Gy/min。克隆形成实验观察H460R细胞条件培养基对H460细胞辐射敏感性的影响;细胞免疫荧光染色检测磷酸化组蛋白H2AX（γH2AX）阳性细胞百分数;流式细胞仪检测细胞周期变化;蛋白质印迹法（Western Blot）检测DNA损伤修复相关蛋白γH2AX和Rad51的表达。结果克隆形成实验结果显示,H460R细胞经不同剂量（2、4、6 Gy）的γ射线照射后,再经H460R细胞条件培养基处理,细胞克隆形成数较未处理组（照射组）均明显增加,差异均具有统计学意义（2、4 Gy:均P＜0.05; 6 Gy:P＜0.01）。免疫荧光染色结果显示,条件培养基组的γH2AX阳性细胞百分数高于对照组[（39.40±2.51）%比（25.21±2.05）%],差异具有统计学意义（P＜0.01）;而照射（4 Gy）联合条件培养基组的γH2AX阳性细胞百分数低于照射组[（60.48±2.79）%比（80.65±2.05）%],差异具有统计学意义（P＜0.001）。流式细胞分析结果显示,照射（4 Gy）联合条件培养基组的G2/M期细胞百分比高于照射组[（26.83±1.42）%比（15.73±1.29）%],差异具有统计学意义（P＜0.001）。Western Blot检测结果显示,照射（4 Gy）联合条件培养基组的γH2AX蛋白表达低于照射组,而Rad51蛋白表达高于照射组。结论在肿瘤微环境中,辐射抗性细胞H460R能通过旁分泌增强H460细胞的辐射抗性,这可能与其旁分泌物能阻滞细胞周期和促进DNA修复有关。