胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾细胞消化方法的研究

摘要

目的 考察不同胰蛋白酶及消化后是否弃去胰蛋白酶对Madin-Darby犬肾(Madin-Darby canine kidney,MDCK)细胞消化效果的影响,并评价培养基中添加胎牛血清对减轻胰蛋白酶细胞毒性的作用.方法 选用5种胰蛋白酶分别消化MDCK细胞,消化5 min后弃去胰蛋白酶为弃去组,不弃去为保留组.观察消化过程,记录细胞达到不同状态所需的时间.完全消化后,检测细胞的活率、结团率、直径.以不同浓度的胰蛋白酶消化MDCK细胞,按培养基是否添加胎牛血清分为含血清和无血清组,检测细胞活性.结果 重组胰蛋白酶消化时间长于动物源胰蛋白酶.保留和弃去组细胞活率均值都大于94.77％,结团率均值均大于34.56％,直径均值分别为17.33和16.97μm且差异有统计学意义(t=4.632,P＜0.001).细胞活性随胰蛋白酶添加量呈现梯度变化.含血清和无血清组的细胞活性差异有统计学意义(t=12.545,P＜0.001).结论5种胰蛋白酶均可完全解离贴壁MDCK细胞,其中重组胰蛋白酶消化时间较长,作用温和,比较适合生产.弃去胰蛋白酶再继续消化的做法可行且有益,胰蛋白酶浓度对细胞活性有影响,胎牛血清可以减轻胰蛋白酶的潜在毒性.