基于内皮细胞/周细胞构建大鼠视网膜血管新生体外三维模型

摘要

目的:构建基于视网膜微血管内皮细胞(ECs)和周细胞(RMPs)的大鼠视网膜血管新生体外三维模型.方法:分离、纯化、培养大鼠视网膜微血管内皮细胞及视网膜微血管周细胞,选用第3～7代经鉴定后的细胞用于研究,采用细胞示踪剂对细胞进行染色,混合后按表面培养法接种于Matrigel,动态观察,并检测血管新生期间血管内皮生长因子A(VEGF-A)的表达.结果:培养12h时,RMPs被ECs招募,聚集成大小不等细胞团块;24h时,ECs/RMPs共同形成复杂的三维血管样条索网;48h时,网状结构出现明显崩解,仅保持少量不完整的简单网状结构;72h时,血管样条索网完全崩解.在三维模型发生过程中,VEGF-A的表达量升高;退化时,VEGF-A的表达量下降.结论:成功基于视网膜微血管全成分细胞ECs和RMPs构建了大鼠视网膜血管新生体外三维模型.