Rhodococcus rhodochrous J1腈水合酶在大肠杆菌中的表达策略

摘要

针对红球菌低分子量腈水合酶(L-NHase)在重组菌中难以表达这一问题,通过对其α亚基及调控蛋白NhlE基因的核糖体结合位点和α,β亚基间隔序列的长度进行改造,构建了重组表达载体,实现了L-NHase及其调控蛋白NhlE在E.coli BL21(DE3)中过量表达.通过培养条件优化,得到最佳表达条件为:37℃培养菌体浓度(OD6000)到1.0时,加入终浓度为0.1 g/L的CoCl2·6H20,0.6 mmol/L的IPTG,然后在24℃下诱导表达24 h.最终得到的重组蛋白粗酶液的活性为(109.9±5.5)U/mg.采用Strep-tag/Strep-Tactin亲和层析简化了L-NHase的纯化方法,本研究结果为一些难于异源重组表达的多亚基蛋白质的表达具有一定的借鉴意义.