circPRKCI靶向miR-448对高脂高糖诱导胰岛β细胞损伤的影响

摘要

目的考察环状RNA(circRNA)circPRKCI是否靶向miR-448调节高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤。方法胰岛β细胞被分为Con组(正常对照,11.1 mmol/L葡萄糖)、Model组(高脂高糖模型,33.3 mmol/L葡萄糖+0.25 mmol/L棕榈酸)、Model+pcDNA组(高脂高糖模型+转染pcDNA)、Model+pcDNA-circPRKCI组(高脂高糖模型+转染pcDNA-circPRKCI)、Model+anti-miR-NC组(高脂高糖模型+转染anti-miR-NC)、Model+anti-miR-488组(高脂高糖模型+转染anti-miR-488)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-NC组(高脂高糖模型+转染pcDNA-circPRKCI+miR-NC)、Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448组(高脂高糖模型+转染pcDNA-circPRKCI+miR-448)。采用qRT-PCR检测circPRKCI、miR-448、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA和白细胞介素-1β(IL-1β)mRNA表达,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(cleaved-cysteinyl aspartate specific proteinase,cleaved-caspase)3和cleaved-caspase9蛋白表达。运用荧光素酶报告分析circPRKCI与miR-448的靶向结合。结果与Con组比较,Model组胰岛β细胞中circPRKCI表达量减少,miR-488表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达量、TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达量增加(P<0.05)。与Model+pcDNA组比较,Model+pcDNA-circPRKCI组胰岛β细胞中circPRKCI表达量增加,凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达量、TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达量减少(P<0.05)。circPRKCI靶向调控miR-448的表达。抑制miR-448表达后,Model+anti-miR-488组胰岛β细胞的miR-488表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白、TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达量均比Model+anti-miR-NC组降低(P<0.05)。上调miR-448表达后,Model+pcDNA-circPRKCI+miR-448组胰岛β细胞的miR-488表达量、凋亡率、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白、TNF-αmRNA和IL-1βmRNA表达量均比Model+pcDNA-circPRKCI+miR-NC组提升(P<0.05)。结论circPRKCI通过靶向miR-448,减少细胞凋亡和炎性因子表达,从而保护高脂高糖诱导的胰岛β细胞损伤。