过表达ABAD对Aβ1-42刺激的293T细胞线粒体功能和自噬水平的影响

摘要

目的 探讨β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)刺激下,在293T细胞中过表达淀粉样蛋白结合醇脱氢酶(ABAD)对线粒体功能及自噬相关标记蛋白水平的影响.方法 将正常培养的293T细胞随机分为:(1)Control组、过表达ABAD组、Control给药组(Aβ1-425μmol/L、10μmol/L、20μmol/L)、过表达ABAD给药组(Aβ1-425μmol/L、10μmol/L、20μmol/L);(2)Control组、sh-ABAD组;(3)Control+DMSO组、Control+CCCP组、过表达ABAD+DMSO组、过表达ABAD+CCCP组(WT/Aβ10μmol/L).三磷酸腺苷(ATP)试剂盒测定Control组、过表达ABAD组、Control给药组、过表达ABAD给药组细胞的ATP含量;活性氧(ROS)试剂盒测定活性氧生成量.Western blot法检测Control+DMSO组、Control+CCCP组、过表达ABAD+DMSO组、过表达ABAD+CCCP组线粒体自噬相关蛋白表达水平.通过标准曲线换算ATP细胞含量和活性氧生成量,采用Image J对Western blot条带进行量化.结果 Control组与过表达ABAD组ATP含量和活性氧生成量变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05);与Control给药组相比,在Aβ1-42(10μmol/L)刺激后,过表达ABAD给药组的ATP含量减少,差异具有统计学意义(P0.05);与Control+CCCP组相比,过表达ABAD+CCCP组在Aβ1-4210μmol/L诱导后线粒体自噬相关蛋白P62降低、LC3B升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 过表达ABAD不影响293T细胞的线粒体功能,但在特定浓度Aβ1-42刺激下可影响线粒体ATP产生及促进线粒体自噬发生.