农杆菌介导的木薯转基因研究初报

摘要

将米曲霉植酸酶基因phyA克隆于植物表达载体pBI121的CaMV35S启动子(P35S)下游,构建了含有P35S-phyA-TNOS表达盒的重组质粒pBI-phyA,并用电脉冲法将其导入大肠杆菌中。通过三亲接合将pBI-phyA质粒由大肠杆菌导入根癌农杆菌LBA4404菌株,获得带有phyA基因的根癌农杆菌工程菌株LBA4404/pBI-phyA。用LBA4404/pBI-phyA转化木薯外植体652个,在含100 mg/L卡那霉素和250 mg/L氨苄青霉素的MS分化培养基上诱导分化芽,获得24株抗卡那霉素转化苗。以转化苗和未转化植株的总DNA为模板,用phyA基因的同源序列为引物,进行聚合酶链式反应(PCR),结果表明9株转化苗的PCR结果为阳性,初步证明目的基因phyA已经转入木薯中。