骨痹止痛丸对肾阳虚大鼠软骨调控作用机制研究

摘要

目的探讨骨痹止痛丸对肾阳虚大鼠软骨的保护作用及调控机制。方法根据随机数字表法将30只SPF级6周龄雄性大鼠分为对照组、肾阳虚组、骨痹止痛丸组,每组10只。对照组大鼠后肢肌肉注射0.9%生理盐水0.3 mL,每日1次,连续22天。肾阳虚组大鼠后肢肌肉注射氢化可的松混悬液2.5 mg/100 g,每日1次,连续进行22天。骨痹止痛丸组大鼠后肢肌肉注射氢化可的松混悬液2.5 mg/100 g,每日1次,连续22天,从第8天开始,以1.05 g/(kg·d)的剂量给予骨痹止痛丸水溶液灌胃给药,每日1次,连续进行15天,直至第22天。给药期间记录大鼠体质量变化。连续给药22天后麻醉大鼠,腹主动脉取血;处死大鼠,取肾脏和膝关节软骨组织,以苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法进行病理切片观察。实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qRT-PCR)法检测各组大鼠膝关节软骨中Col2a1、Col9a1、Col10a1、Col11a1、Acan、Comp、Hapln1、Ibsp、Wwp2、Sox9、Sox5、Sox4等基因的表达水平。酶联免疫吸附法(enzyme cinked immunosorbent assay,ELISA)法检测各组大鼠血清促肾上腺皮质激素(adreno cortico tropic hormone,ACTH)、皮质醇(cortisol,CORT)、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)和睾酮(testosterone,T)水平。结果(1)与对照组比较,肾阳虚组血清ACTH、T、LH、CORT水平显著降低(P<0.05),经骨痹止痛丸给药治疗后,以上指标显著上升(P<0.05)。(2)膝关节软骨病理切片结果:肾阳虚组大鼠膝关节软骨层表面塌陷,凹凸不平,软骨层明显变薄,软骨细胞固缩,软骨基质成分明显减少。骨痹止痛丸组软骨层增厚,表面光滑连续,相比肾阳虚组软骨层中软骨细胞数量、软骨基质和同源软骨细胞数目增加,软骨层下骨小梁成分增宽,分布数量增加。肾脏病理切片结果:对照组肾脏肾小管和肾小球均未见异常变化;肾阳虚组肾小球扩张,近曲小管变性,远曲小管扩张。骨痹止痛丸组肾小球扩张程度减轻,肾小管功能状态改善,近曲小管未见明显变性,远曲小管未见明显扩张。(3)qRT-PCR检测结果:肾阳虚组较对照组的Col2a1、Col9a1、Col10a1、Col11a1、Acan、Comp、Hapln1、Ibsp、Wwp2、Sox9、Sox5、Sox4等基因表达明显下调(P<0.05);与肾阳虚组相比,骨痹止痛丸组以上基因表达明显上调(P<0.05)。结论骨痹止痛丸能够有效改善大鼠肾阳虚的病理状态,并通过调控Col2a1、Col9a1、Col10a1、Col11a1、Acan、Comp、Hapln1、Ibsp、Wwp2、Sox9、Sox5、Sox4等基因的表达,从而达到保护软骨的效果。