应用图像细胞仪测定细胞DNArn倍体的标定方法

摘要

国内外大量基础和临床研究资料的研究资料表明肿瘤细胞DNA的倍体是恶性肿瘤细胞特征性的标志之一。测量和分析DNA含量及倍体对恶性肿瘤的诊断、恶性程度、疗效估计、预测愈后都具有重要的价值，在国内外的肿瘤病理诊断中得到了广泛的应用［1,2］，目前主要采用的是流式细胞测定(flow cytometry,FCM)，和图像细胞测定(image cytometry or cytophotometry，简称ICM)。目前认为ICM对肿瘤细胞DNA的测量更具有实际意义。美国CAS公司专门设计制造了图像细胞分析仪称为细胞分析系统。其光密度测试功能和流式细胞仪的功能是相似的。目前国际上公认的标准化测量DNA仪器的基本原理是采用计算机灰度分析随后通过一定的公式转换成光密度，主要应用积分光密度(IOD)来测定细胞的DNA倍体［3,4］，分光光度的测量必须有一个严格的标定标准，否则会导致测量的准确度，目前，国内生产的图像细胞分析仪绝大多数均未做这种标定，因这种具有二倍体、四倍体、八倍体的定标标准玻片是需要进口的，没有定标的图像细胞分析仪的DNA倍体测量是不准确的，不能作为诊断应用，为此本文介绍一种在国内能自制的而且能达到国际细胞学会所规定的标准的实用标定方法。rn 材料与方法rn 材料：老年Wistar大鼠(12月以上)的肝脏。正常大鼠肝脏细胞主要是两倍体，但是超过1年以上的老年大鼠肝脏具有二倍体，四倍体、八倍体三种细胞，我们取出老鼠的肝脏后做成肝脏的印片，然后用10%甲醛固定30 min，随后空气干燥5 min，用5 mol盐酸室温水解1 h，再用Feulgen Azure A(孚尔根天青A)染色1 h，完成后用图像分析仪测定200只细胞，制成一直方图，以X轴为积光密度或称为细胞质量，Y轴为细胞测定数。此时即可得到一个标准的直方图，以此作为DNA倍体的测量的基础。