黑鲷钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)基因克隆及表达差异

摘要

钙调磷酸酶B同源蛋白2(CHP2)为参与细胞内pH及细胞增殖调控的关键因子.用RACE末端PCR方法得到黑鲷CHP2(AsCHP2)基因全长cDNA,并利用生物信息学方法分析该基因的序列特征与同源性;同时利用实时荧光定量PCR方法检测AsCHP2的mRNA在黑鲷整体仔鱼,90 d、180 d黑鲷,杂交F2(真鲷♂×黑鲷♀)及回交F1(黑鲷♂ ×杂交F1♀)的脑、心脏、肌肉、肝脏和性腺等组织中的表达.研究结果表明:(1)AsCHP2 cDNA序列全长1722 bp,5′-非编码区(UTR)长度69 bp,3′-UTR长度1069 bp,开放阅读框长度为585 bp,编码194个氨基酸;其结构域包含2个EF-hand结构及1个核输出信号;其蛋白分子质量为21.87 ku,理论等电点为4.89;同源建模获得了CHP2的二级与三维结构.AsCHP2基因的核苷酸序列与其他鱼类的相似性为86％ ～81％,编码的氨基酸序列与其他鱼类的相似性为80％ ～72％.邻接系统树显示了黑鲷C H P2氨基酸序列与其他鱼类的进化关系.序列比对与结构分析表明,AsCHP2基因具有典型的CHP2基因结构.(2)AsCHP2的mRNA在黑鲷的仔鱼期(5～35 d)及大规格个体的脑、肝脏及肌肉组织中均有表达,在90 d个体各组织中的表达量均高于在180 d个体各组织中的表达量;在180 d黑鲷、杂交F2及回交F1的个体中,基因在脑、肝脏、肌肉及性腺等不同组织中均有表达,且均在心脏中高表达、在性腺中低表达.这些结果显示,C H P2基因在海水鱼类的生长、发育过程中发挥功能.