乙型肝炎病毒相关肝细胞癌中关键microRNA的鉴定及其功能研究

摘要

目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)关键microRNA的鉴定及其对HCC细胞增殖和迁移能力的影响。方法:①利用GEO2R工具分析GEO数据库中GSE69580和GSE67882数据集,筛选HBV相关HCC组织与正常肝脏组织之间的差异表达miRNAs(DEMs);②利用miRTarBase数据库预测miRNAs的靶基因,并通过DAVID数据库对DEMs的靶基因进行基因本体论(GO)功能注释分析与京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;③利用蛋白-蛋白互作(PPI)网络分析确定DEMs的关键miRNAs,并利用miRNACancerMAP数据库分析miRNAs可能参与的信号通路;④使用Kaplan-Meier Plotter数据库分析关键miRNAs与HCC临床预后的关系;⑤使用MTT法和划痕实验验证DEMs对HCC细胞增殖和迁移能力的影响。结果:通过生物信息学分析共鉴定出12个上调DEMs和1个下调DEMs,并通过GO和KEGG功能富集分析表明,miR-93和miR-125b参与MAPK、PI3K-AKT和P53等肿瘤相关信号通路。通过Kaplan-Meier plotter生存分析发现,miR-93表达水平与HBV相关HCC患者的预后负相关(P=0.036),而miR-125b表达水平与HBV相关HCC患者的预后呈正相关关系(P=0.032)。在HBsAg阳性的肝癌细胞系MHCC-97H中,过表达miR-93或抑制miR-125b均可增强MHCC-97H细胞的增殖和迁移能力(均P<0.05),而过表达miR-125b或抑制miR-93可降低MHCC-97H细胞增殖和迁移能力(均P<0.05)。结论:miR-93和miR-125b是HBV相关HCC的关键miRNAs,且上调miR-125b或下调miR-93可抑制肝癌细胞系MHCC-97H的增殖和迁移能力。