miR-20a-5p在结核分枝杆菌感染的人巨噬细胞中负向调控Jnk2基因的表达

摘要

目的分析结核分枝杆菌(Mtb)感染的人巨噬细胞中miR-20a-5p对Jnk2基因表达的影响,探究miR-20a-5p基因调控细胞内信号通路的潜在机制。方法用miR-20a-5p、miR-20a-5p抑制剂(miR-20a-5p inhibitor,简写为miR-20a-inh)以及阴性对照(negative control,NC)慢病毒(慢病毒携带绿色荧光蛋白GFP标记)分别转染人巨噬细胞THP-1,流式细胞仪分选出GFP阳性THP-1细胞并用H37Ra感染,实时定量PCR技术(qPCR)检测AKT/JNK信号通路基因Akt1、Akt2、Jnk1、Jnk2的表达。蛋白质印迹法检测H37Ra感染的GFP+THP-1细胞中总Jnk2和p-JNK的蛋白表达水平。结果在miR-20a-5p过表达的THP-1细胞中,Jnk2基因表达水平降低,当miR-20a-5p被抑制时,Jnk2基因表达水平升高。蛋白质印迹法检测蛋白质水平上的p-JNK2(p54)表达趋势与qPCR结果相一致,即与miR-20a-5p表达呈负相关。结论在基因和蛋白表达层面证实结核分枝杆菌感染人巨噬细胞后miR-20a-5p负向调控Jnk2表达。