非洲猪瘟病毒LAMP可视化检测方法的建立

摘要

利用环介导等温扩增技术(LAMP),根据非洲猪瘟病毒(ASFV)ASFV p72基因保守序列设计一组LAMP引物。采用单因素试验,对影响LAMP反应的5个重要因素反应温度、甜菜碱浓度、Mg2+浓度、dNTPs浓度、Bst 3.0 DNA聚合酶浓度进行优化,使用钙黄绿素-MnCl2显色液进行可视化判定,并进行灵敏度和特异性检测。结果表明,优化后的LAMP反应可检测低至103拷贝/μL的ASFV模板,且具有良好的特异性。反应体系中各成分的最佳浓度分别为甜菜碱1.25 mol/L、Mg2+8 mmol/L、dNTPs 1.25 mmol/L、Bst 3.0 DNA聚合酶320 U/mL,最佳反应温度为67℃。试验成功建立了ASFV LAMP可视化检测方法,适合猪场和农户进行ASFV的现场快速检测。