非洲猪瘟病毒p30基因纳米PCR检测方法的建立

摘要

为了建立准确、敏感的早期快速检测非洲猪瘟病毒(ASFV)的分子生物学方法,根据ASFV中p30蛋白在感染机体中早期表达的特点,设计出1对ASFV中p30基因保守序列的特异性引物,应用纳米PCR建立一种适用于早期检测ASFV的方法,并对其敏感性、特异性和临床样品检测进行研究和分析。结果显示:该纳米PCR的最低检出限为2.47×10^(3)copies/μL,而普通PCR的最低检出限为2.47×10^(4)copies/μL,表明纳米PCR的敏感性是普通PCR的10倍;同时,与猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒均未发生交叉反应。此外,分别应用所建立的ASFV p30基因纳米PCR和普通PCR对18份临床样品进行检测,纳米PCR的阳性率为33.33%,普通PCR的阳性率为22.22%。上述结果表明,建立的纳米PCR检测方法可以对早期感染ASFV的病猪进行快速临床检测,具有良好的敏感性和特异性,为非洲猪瘟的诊断和防控提供了一定的技术保障。