过表达Atg5蛋白对巨噬细胞泡沫化程度的影响

摘要

目的探讨过表达Atg5蛋白对巨噬细胞泡沫化程度的影响。方法采用Atg5慢病毒和对照组病毒感染Raw264.7巨噬细胞,建立对照细胞系(对照组)和Atg5过表达细胞系(观察组)。两组细胞分别加入50 mL/L ox-LDL诱导形成泡沫化细胞。采用Western blot分析两组细胞蛋白p62、LC3、CD36和SR-A的变化;采用高效液相法检测两组细胞内胆固醇脂(CE)、游离胆固醇(FC)和总胆固醇(TC)的变化;采用免疫荧光和电子显微镜分析两组细胞内脂滴的含量;采用ELISA检测两组细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平。结果与对照组比较,观察组细胞自噬底物p62水平显著下调,LC3-Ⅱ水平显著上调(P<0.05)。与对照组比较,观察组巨噬细胞CE、FC和TC含量均显著下调(P<0.05)。观察组细胞脂质水平和脂滴的数量较对照组明显下降(P<0.05)。与对照组比较,观察组细胞炎症因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平显著下调(P<0.05)。结论自噬核心蛋白Atg5过表达可显著提高巨噬细胞自噬水平,可能通过自噬降解胞内胆固醇等脂质,预防巨噬细胞泡沫化,进而降低动脉粥样硬化的发生。