斑马鱼Tph1a蛋白表达、纯化及对脂代谢基因的影响

摘要

对斑马鱼色氨酸羟化酶1a (Tph1a)进行原核表达、纯化,探究其在斑马鱼脂代谢中的作用。根据大肠埃希菌的偏爱密码序列,优化斑马鱼tph1a编码区,插入原核表达载体pET-28a,构建融合蛋白表达质粒,并诱导表达、纯化和复性后,腹腔注射斑马鱼,检测其对脂代谢基因表达的影响。结果表明:重组蛋白Tph1a表达形式为包涵体;纯化和复性后的蛋白质具有57 ku的特异性条带;腹腔注射复性蛋白后,高脂组斑马鱼acc、pgc1α基因等表达上调,lpl基因表达下调,且pgc1α基因的表达丰度远高于其他脂代谢基因。这一研究成功构建了原核表达载体pET-28a-tph1a,获得体外高效表达;该蛋白质不仅诱导肥胖斑马鱼的长链脂肪酸合成阻滞,更促进脂肪酸氧化与分解,为探究Tph1a在鱼类脂代谢调控中的功能奠定了基础。