HpaA IgY抑制小鼠胃内幽门螺杆菌的定植

摘要

目的在构建基因工程菌pQE30-HpaA-DH5α的基础上,制备HpaA重组蛋白,以此为抗原,制备抗HpaA的蛋黄抗体(HpaA IgY)。通过小鼠口服试验,验证HpaA IgY阻止H.pylori在胃内定植的作用,为研制预防H.pylori感染的制剂奠定基础。方法大量诱导工程菌pQE30-HpaA-DH5α,获得重组蛋白HpaA,免疫产蛋立克体鸡,以水稀释法联合硫酸铵沉淀法提纯IgY,SDS-PAGE分析纯度,Bradford法测定浓度,Western blot鉴定对相应抗原的特异性,ELISA法检测效价。建立H.pylori感染Balb/c小鼠的动物模型,预防组在小鼠灌喂H.pylori菌液前灌喂不同剂量的HpaA IgY。组织学检查和细菌培养观察H.pylori定植。结果提纯后的HpaAIgY纯度为90%,浓度为24.6mg/mL,Western blotting证实有良好抗原结合特异性,ELISA效价为1∶12800。阳性对照组H.pylori的感染率为70.4%,12周后的感染率为88.9%。预防组的感染率明显低于阳性对照组,随IgY剂量的增加,感染率降低。IgY的剂量为6mg/mL时,能达到预防效果。结论成功制备出高纯度、高浓度、高效价的特异性HpaA IgY,在小鼠体内能阻止H.pylori的定植,有望进一步开发成为预防H.pylori感染的制剂。