检测大鼠尿金属硫蛋白竞争ELISA法的建立和初步应用

摘要

目的建立竞争酶联免疫吸附法（ELISA）用以检测大鼠尿金属硫蛋白（UMT）的含量。方法用标准MT抗原包被酶标板,加入待测样品或标准MT与包被MT竞争鼠抗MT抗体（一抗）。再加入生物素化抗大鼠IgG（二抗）与一抗进行反应,然后在二抗联与亲和素化辣根过氧化物酶使底物显色,根据吸光度值计算样品浓度。结果该方法在150～2.34μg/ml间线性关系良好（r=0.9899）;批内精密度为3.38%～6.43%,批间精密度为5.32%～9.38%;加标回收率为90.13%～96.40%;雄性和雌性大鼠UMT含量分别为17.74μg/mgCr和15.97μg/mgCr。结论该方法简便,灵敏,具有较好的精密度和准确度,可用于大鼠UMT的检测。正常大鼠尿中含有MT,但雄性和雌性大鼠之间UMT无明显差异。