斯氏狸殖吸虫成虫半胱氨酸蛋白酶基因片段的表达及鉴定

摘要

目的　获得表达斯氏狸殖吸虫半胱蛋白酶基因片段编码多肽 ,对其免疫反应性作初步研究 ,在吸虫所致疾病的血清学诊断的应用奠定基础。方法　用PCR法扩增目的基因片段 ,1%琼脂糖凝胶回收纯化后与PinPointT载体相连 ,并导入到大肠杆菌JM10 9菌株中去 ,诱导表达其编码的多肽片段。用裂解液制备抗原标本 ,经SDS PAGE电泳后 ,经考马斯亮蓝和生物素链亲合素碱性磷酸酶染色检测其表达情况 ,Westernblotting鉴定其免疫反应性。结果　转化实验共获得8株阳性重组子 ,经测序鉴定证实仅 1株正向连接。经过诱导表达 ,制备重组抗原标本 ,经SDS PAGE、转膜后生物素 链亲和素 碱性磷酸酶系统染色显示在 3 2× 10 3处有一融合蛋白条带 ,反向连接菌株与之相似 ,也出现一条表达带 ,但分子量远小于预期值 ,仅仅 14× 10 3左右。Western blotting显示仅正向连接菌株在 3 2× 10 3的位置有一阳性染色条带。结论　成功的构建了斯氏狸殖吸虫半胱氨酸蛋白酶的原核表达载体 ,经过诱导后表达的重组抗原 。