香蕉穿孔线虫双重PCR快速检测技术研究

摘要

香蕉穿孔线虫(Radopholus similis)是国际上公认的植物检疫性有害生物之一,是热带地区果树上最重要的线虫。通过设计的属水平上的特异性引物R1、R2(R1/2)和种水平上的特异性引物RS1、RS2(RS1/2)进行双重PCR扩增香蕉穿孔线虫,可扩增出长度为362和291 bp的2个特异性片段谱带。同时分别对检测体系中反应参数进行优化,最佳延伸温度为51.4℃,引物R1/2与RS1/2最佳浓度配比为0.2μm o.lL-1/1.2μmol.L-1,并测试检测引物的灵敏度,能进行有效检测的最低起始核酸量为100 pg;同时,也能对单条线虫进行检测以及样品中线虫的检测。专化性测试证明,2对引物能有效地进行香蕉穿孔线虫的快速分子诊断。