人参皂甙单体Rh_2对人K562白血病细胞增殖和凋亡的时效和量效分析

摘要

目的:观察人参皂甙单体Rh2对人K562细胞增殖和凋亡的影响,分析该影响的时间和剂量依赖性。方法:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验系实验室完成。①取对数生长期人K562细胞制成细胞悬液,浓度1×108L-1,接种于96孔培养板内,每孔100μL,6h后加入终质量浓度分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L的人参皂甙单体Rh2100μL(购自吉林省宏久生物科技股份有限公司),每一浓度组均设4孔。对照孔及调零孔加100μL培养液。各孔总体积均为200μL。在加药后48h采用四甲基偶氮比色法检测各孔中细胞的抑制率。在接近于半数抑郁浓度的人参皂甙单体Rh2处理作用于细胞6,12,24,48和72h后采用四甲基偶氮唑盐比色法计算抑制率。②在倒置显微镜下观察加药与未加药孔K562细胞形态。③常规苏木精-伊红染色,检测25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用0,12,24和48h后K562细胞的凋亡率,并观察人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L时,培养24h后的细胞凋亡率。结果:①人参皂甙单体Rh2对K562细胞生长抑制作用:当人参皂甙单体Rh2质量浓度为6.25,12.5,25.0,50.0和100.0mg/L时,抑制率逐渐升高,呈现明显剂量依赖性。人参皂甙单体Rh2对K562细胞的半数抑制浓度为25.8mg/L,处理K562细胞6,12,24,48,72h后细胞抑制率逐渐升高,且后4个时间点明显高于处理6h时(t=11.79～50.89,P<0.01)。②人参皂甙单体Rh2对K562细胞形态的影响:细胞经人参皂甙单体Rh2作用后呈现出明显的凋亡细胞形态,细胞分散,体积缩小,胞浆浓缩,细胞核膜消失,细胞核断裂呈小块或碎片状,但细胞膜较完整并可见凋亡小体。③人参皂甙单体Rh2对K562细胞凋亡的影响:在25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用K562细胞0,12,24和48h后,K562细胞的凋亡率依次升高,分别为(3.8±0.5)%,(9.4±1.1)%,(23.2±2.2)%和(34.5±3.5)%(与作用0h比较,t=8.78～20.06,P<0.05～0.01)。人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L培养K562细胞24h,细胞凋亡率依次升高,分别为[(3.7±0.6)%,(9.4±1.3)%,(21.2±2.1)%,(28.5±2.5)%,(31.8±3.4)%,与0mg/L人参皂甙单体比较,t=9.39～18.54,P<0.01]。结论:人参皂甙单体Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间和剂量依赖性。