携改良型HBVpre-S1基因表达载体的构建及表达

摘要

目的:构建携改良型HBVpre-S1基因表达载体。方法:以我国HBV流行株adr的DNA为模板,PCR法提取并扩增HBVpre-S1,用定点突变延伸法完成突变。将突变后的HBVpre-S1基因片段通过双酶切,转化到制备好的DH5a感受态细胞中,纯化、质粒测序后,用醋酸锂法转化酵母细胞AH109。表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western免疫印迹检测。结果:成功扩增出HBV流行株adr的HBVpre-S1基因片段,成功完成HBVpre-S1基因的突变,重组质粒pGBKT7-HBVpre-S1构建成功。Western免疫印迹分析,显示对照无表达,而转化了pGBKT7-HB-Vpre-S1的印迹分析可见明显目的基因蛋白条带且无杂带。结论:成功扩增出HBVpre-S1基因片段并构建出携改良型HBVpre-S1基因表达载体,并在酵母中融合表达成功。