胃癌耐药细胞株OCUM-2M/VP16的建立及其耐药机制

摘要

目的:建立耐VP16的胃癌耐药细胞株,并初步探讨细胞发生VP16耐药的可能机制.方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立OCUM-2M/VP16耐药株.细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算细胞倍增时间.MTT法检测细胞对6种化疗药物的IC50.流式细胞仪分析细胞周期分布.逆转录多聚酶链反应检测caspase-3,P53,DAPK-1,DAPK-2,DAPK-3,Bcl-2,ERCC-1,MDR-1及MRP基因mRNA的表达.结果:OCUM-2M/VP16成功实现了对VP16的耐药,耐药指数为40.53;其增殖速率及细胞倍增时间明显低于OCUM-2M(细胞倍增时间:22.96±0.96h vs 30.29±2.55h,P<0.01).OCUM-2M/VP16对Sn38、奥沙利铂及吉西他滨发生了交叉耐药,但对5-FU及紫杉醇敏感性与亲代类似.OCUM-2M/VP16凋亡相关基因DAPK-2,DAPK-3和Bcl-2表达下调(OCUM-2M表达值为:0.61、0.79及0.81,OCUM-2M/VP16为,0.24、0.45、0.44,P<0.01),耐药相关基因ERCC-1和MDR-1表达上调(OCUM-2M为0.53及0.20,OCUM-2M/VP16则为0.84及0.41,P<0.01).caspase-3,P53,DAPK-1及MRP表达无变化.结论:成功构建胃癌耐药细胞株OCUM-2M/VP16,该细胞株具有交叉耐药特性,耐药机制涉及凋亡、耐药等多个基因表达变化.