慢病毒介导shRNA特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1基因表达抑制舌癌细胞迁移侵袭能力

摘要

目的:探讨特异性沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liver cell-1,PRL-1)基因表达对舌癌细胞迁移、侵袭能力的影响。方法:设计、合成5条针对PRL-1基因的短发夹RNA(short hairpin RNA,sh RNA)干扰序列,构建于慢病毒载体质粒中,PCR电泳及基因测序验证。转染293T细胞,Western blot筛选最佳干扰序列,包装产生慢病毒。转染TCA8113细胞,筛选、建立稳定转染细胞株;real-time PCR检测PRL-1基因沉默效率;划痕实验和Transwell实验分别比较慢病毒转染细胞(KD组)、空病毒转染细胞(NC组)及TCA8113细胞(CON组)迁移、侵袭能力变化。结果:PCR电泳及基因测序证实5条sh RNA序列定向插入慢病毒载体质粒中。Western blot筛选出PRL-1-sh RNA-1基因沉默效率最高,包装获得慢病毒滴度为7×108 TU/ml。通过转染、筛选,建立了TCA8113细胞稳定转染细胞株;real-time PCR测得PRL-1基因m RNA表达明显下降(F=809.120,P=0.000);PRL-1基因沉默后细胞迁移能力降低,穿过人工基底膜的细胞数KD组(25.5±0.4)明显少于NC组(81.5±2.0)和CON组(88.5±2.3)(F=1 092.970,P=0.000)。结论:沉默PRL-1基因表达能有效抑制舌癌细胞迁移、侵袭能力。