汉坦病毒H8205株G1-G2/人源白细胞介素2融合基因的稳定表达和免疫效果

摘要

目的:探讨汉坦病毒H8205株G1-G2/人源性白细胞介素2(IL-2)融合基因在非洲绿猴肾(Vero)细胞获得稳定表达的可能性,评价融合基因pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2的DNA免疫效果。方法:在脂质体介导下,将pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2导入Vero细胞,通过G418筛选获得阳性克隆,用间接免疫荧光(IFAT)、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)等方法检测其在Vero细胞中稳定表达的情况。采用肌肉注射质粒的方法来免疫Balb/c小鼠,免疫3次,加强2次,间隔2周,然后用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清特异性抗体,用空斑减少中和试验检测中和抗体。结果:转染了pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2后在Vero细胞培养上清和胞质中有融合蛋白的表达,其相对分子量为110 ku。pcDNA3.1/HisB-IL-2-G1-G2可诱导小鼠产生特异性抗汉坦病毒抗体和中和抗体,其效价均高于其他对照组,差异有显著性(P<0.05)。结论:融合基因在脂质体介导下能导入Vero细胞并获得稳定表达。融合基因真核载体疫苗免疫Balb/c小鼠可诱导特异性体液免疫应答,为进一步将其用于我国汉坦病毒疫苗研制提供了依据。