电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5抗血清的制备及特性鉴定

摘要

目的制备电压门控型钾通道蛋白Kv 1.5的多克隆抗体,对其特性进行鉴定。方法利用生物信息学方法分析Kv 1.5蛋白的序列,根据亲水性结构、柔韧区、抗原指数及表面概率结构等指标选择一段8个氨基酸序列,据此合成Kv 1.5多肽片段,并将其与载体蛋白钥孔戚血蓝素(KLH)偶联作为免疫抗原,免疫新西兰白兔制备抗Kv 1.5抗血清。辛酸-硫酸铵法纯化抗血清,对纯化后的抗血清进行ELISA、Western blot鉴定。结果成功获得抗Kv 1.5合成肽的抗血清,该抗血清效价为1:64 000,可与Kv 1.5合成肽及天然Kv 1.5蛋白出现特异性反应,该抗血清识别的相应抗原的相对分子质量(Mr)为59 kD。同时,Western blot结果显示,所制备的抗血清能识别大鼠心脏天然Kv 1.5蛋白。结论合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性,可用于制备相应的抗血清,并且制备的抗血清经ELISA、Western blot鉴定后特异性较好。