花生病程诱导蛋白基因AhPIP1和启动子的克隆、序列分析及原核表达

摘要

本文采用RACE法克隆了花生病程诱导基因(pathogenesis-induced protein gene)全长,命名为AhPIP1,并在GenBank登录,登录号为EU860093。序列分析表明该基因的开放读码框579bp,编码193个氨基酸。以YY20基因组DNA为模板PCR扩增获得AhPIP1基因组序列长1883bp,包含3个外显子和长度分别为602bp和600bp的2个内含子。同源性比较发现AhPIP1与辣椒病程诱导蛋白CaPIP1(ABF72432,AAT35532)相似性达82%。采用Genome Walking方法获得AhPIP1启动子,序列分析表明该启动子序列长513bp,包含干旱胁迫、病程胁迫应答元件和生长素、赤霉素应答元件。构建pET32a-AhPIP1原核表达载体,转化表达受体菌E.coli BL21,原核表达获得大小约40kD AhPIP1融合蛋白,与推测的AhPIP1基因编码产物的大小一致,表明AhPIP1基因在大肠杆菌中能够表达。