孤儿受体TR3与人CNTF受体基因中顺式元件作用机制的研究

摘要

应用两对人工合成的寡核苷酸引物，分别通过ＰＣＲ扩增，得到了ＣＮＴＦＲα－Ｉ５ＮＢＲＥ序列两侧的两个扩增片段，将其和在ＥｃｏＲⅤ位点切开的ｐＴ７ｂｌｕｅ一起定向连接，得到了插入在ｐＴ７ｂｌｕｅ的ＥｃｏＲⅤ位点的缺失了ＮＢＲＥ序列的ＣＮＴＦＲα－Ｉ５，然后再将其切下，插入到具有ＳＶ４０起动子的ＣＡＴ基因表达载体的ＢｇｌⅡ位点，构建了ＣＡＴ报道基因．细胞转染和ＣＡＴ实验表明，缺失ＮＢＲＥ后，ＣＮＴＦＲα－Ｉ５仍具有增强子功能，ＴＲ３通过该增强子对ＣＮＴＦＲα的表达具有诱导作用，说明这种诱导作用并不是单一通过ＮＢＲＥ序列进行的．