SOX-9和转化生长因子-β1共同诱导大鼠脂肪干细胞向软骨细胞分化

摘要

目的探讨应用SOX-9和TGF-β1基因转染大鼠ADSCs(Adipose stromal cells,ADSCs)后,目的基因分泌情况及向软骨细胞的分化效果,为构建新型的组织工程软骨种子细胞提供思路。方法6周龄健康雄性Wistar大鼠2只,体重约150g。扩增、提取质粒pcDNA3.1-TGF-β1、pcDNA3.1-SOX-9。分离、纯化Wistar大鼠ADSCs,倒置相差显微镜观察原代和传代ADSCs形态学改变,免疫荧光法检测细胞表面标志。将SOX-9和TGF-β1基因单独或共转染第3代ADSCs,按转染情况分为5组:对照组、转染空载体组、转染SOX-9组、转染TGF-β1组、SOX-9与TGF-β1共转染组。对转染后细胞进行筛选,MTT法测定筛选后细胞的增殖活性,RT-PCR和Westernblot法检测筛选后细胞的表达。结果免疫荧光法检测ADSCs的CD29、CD44呈阳性反应,CD34、CD106呈阴性反应。MTT法测定各组细胞在490nm波长处的吸光度(A)值,未转染组、空载体组与SOX-9组、TGF-β1组、SOX-9与TGF-β1共转染组间差异显著(P<0.01)。RT-PCR和Western blot检测目的基因和蛋白的表达量,SOX-9表达以转染SOX-9组最多;TGF-β1表达以SOX-9与TGF-β1共转染组组最多;II型胶原表达以SOX-9与TGF-β1共转染组最多。结论SOX-9和TGF-β1基因共同转染ADSCs修复软骨缺损是一个较有前景的发展方向,对组织工程软骨应用于临床具有重要意义。