犬细小病毒时间分辨荧光免疫法的建立及初步应用

摘要

随着人们物质生活水平不断提升,宠物犬的养殖数量不断增加,由犬细小病毒(CPV)引起的疾病的发病率也呈升高趋势。CPV是我国出入境口岸宠物检疫的重要病原之一,为提高检疫效率和准确率,本研究建立了犬细小病毒时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)方法。本研究主要选用犬细小病毒特异性单克隆抗体(MAb)4C11和7D5分别作为包被抗体和检测抗体,检测抗体用镧系元素中的铕(Eu3+)标记,制备出双抗体夹心TRFIA分析法。结果显示,该方法灵敏度可达0.79 ng/m L;CPV标准品回收率为96.48%~105.17%,同步检测CCV、CDV、CAV-1、CPIV标准品,结果均为阴性;重复性检测发现批内和批间变异系数分别为4.78%~6.03%和4.23%~6.42%;4℃可保存6个月以上,37℃可保存7 d以上。临床检测结果与PCR方法一致。结果表明,该方法具有灵敏度高、稳定性好、特异性强、重复性好、操作便捷,受本底因素影响少等优点,适用于CPV的快速检测。且读卡方式多样,满足了不同实验条件的要求,具有较高的临床实用价值和推广价值。