马尾松花粉多糖硫酸酯对肝癌HepG2细胞的诱导分化

摘要

目的:观察马尾松花粉多糖硫酸酯(SPPM60)对人肝癌细胞株HepG2的诱导分化作用,并对其机制进行初步探讨.方法:MTT法检测HepG2细胞增殖活力;倒置显微镜、HE染色及透射电镜观察细胞形态;流式细胞技术检测细胞周期;荧光分光光度计检测细胞内钙离子浓度的变化;免疫细胞化学方法检测甲胎蛋白的表达,溴甲酚绿法测定白蛋白含量;重氮反应比色法测定γ-谷氨酰转肽酶活力,比色法测定碱性磷酸酶活力,考马斯亮蓝法测定总蛋白含量.结果:经SPPM60处理后,HepG2细胞的增殖受到抑制;细胞形态趋于正常;与对照组相比,SPPM60组G0/G1期细胞数增加(76.97%±0.91%vs64.62%±0.18%,P<0.05),S期细胞数减少(17.21%±0.71%vs24.26%±0.15%,P<0.05),G2/M细胞数减少(5.82%±0.20%vs11.13%±0.34%,P<0.01);[Ca2+]i降低;甲胎蛋白表达降低,白蛋白分泌量上升(6.77±0.33mg/106细胞vs4.87±0.30mg/106细胞,P<0.05),γ-谷氨酰转肽酶与碱性磷酸酶活力降低(16.3±0.7U/gvs22.3±1.2U/g;223.3±15.7U/gvs311.1±13.4U/gP<0.05或0.01),胎盘型碱性磷酸酶的比例降低(46.4%±1.5%vs62.5%±2.3%,P<0.05).PPM60组细胞没有明显变化.结论:硫酸酯化赋予了SPPM60抑制HepG2细胞的活性,其作用机理可能是降低细胞内钙离子浓度,阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导HepG2细胞分化逆转其恶性.