染料亲和层析分离纯化酵母两种脱氢酶

摘要

目的探讨三嗪活性染料Cibacron Blue F3GA和KE-3B艳红制备的亲和层析柱用于建立分离纯化面包酵母乙醇脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的方法。方法在琼脂糖凝胶Sepharose 6B上,分别偶联三嗪活性染料Cibacron Blue F3GA和KE-3B艳红,制成染料亲和层析柱。将面包酵母经超声破碎、高速离心、硫酸铵分级沉淀、透析、冰冻干燥等步骤得到脱氢酶粗品,再经染料亲和层析柱进一步纯化。结果经过固定有Cibacron Blue F3GA的亲和层析柱,乙醇脱氢酶的纯化倍数为2.0,酶活性回收率为30.8%;经过固定有KE-3B艳红的亲和层析柱,葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的纯化倍数为23.2,酶活性回收率为66.0%。所得的乙醇脱氢酶在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳为1条带。结论染料配基亲和层析可作为面包酵母乙醇脱氢酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的精制纯化方法。