Caspase-3在roscovitine诱发PC12细胞凋亡中发挥重要作用

摘要

我们已证实周期蛋白激酶(cyclin-dependent kinases)cdk2、cdc2和cdk5抑制剂roscovitine诱导PC12细胞凋亡。本实验应用caspase-3免疫细胞化学与hoechst 33342荧光化学双标、MTT比色法细胞活性测定和Western blot方法,研究了 caspase-3在roscovitine所致PC12细胞凋亡中的作用。结果显示,roscovitine(50μmol／L)处理PC12细胞12h,细胞核染色质凝缩及核碎片形成,同时胞浆中出现caspase-3阳性标志,caspase-3阳性细胞占细胞总数的42％。非特异性caspases抑制剂Z-VAD-FMK(50 μmol／L)和caspase-3特异性抑制剂Z-DEVD-FMK(100 μmol／L)可部分降低roscovitine所致的细胞死亡, 使细胞存活率分别由29．03％(roscovitine)增至58．06％(Z-VAD-FMK+roscovitine)和45．16％(Z-DEVD-FMK+roscovitine); 用单克隆non-erythroid α-spectrin抗体检测roscovitine处理组细胞匀浆提取液,表明caspase-3裂解的特异性spectrin 120 kDa 蛋白产物较对照组显著增加。提示细胞凋亡成分caspases参与roscovitine所致的细胞凋亡,其中caspase-3发挥重要作用。