人癌症高表达蛋白1在有丝分裂期和分裂间期的定位研究

摘要

目的:分析人癌症高表达蛋白1(HEC1)在有丝分裂期和分裂间期的定位和表达调控相关蛋白基序。方法:用逆转录聚合酶链反应法从HeLa细胞中克隆HEC1基因cDNA,并构建其真核表达载体;对HEC1 cDNA测序序列进行生物信息学分析;HEC1真核表达载体转染293T细胞后,用Western blot进行表达分析;并用有丝分裂抑制剂(nocodazole)对细胞进行同步化和释放,观察有丝分裂期和分裂间期时HEC1定位。结果:电泳和酶切鉴定,得到含有HEC1的真核表达载体,Westernblot证实表达载体可在转染细胞中表达重组HEC1蛋白;HEC1测序序列分析发现多个与定位和调控相关基序,提示HEC1可能受APC/C蛋白酶体调控;HEC1在有丝分裂期定位于染色体,在分裂间期定位于细胞质靠近细胞核部位。结论:获得HEC1基因cDNA及表达载体,HEC1定位随不同细胞周期而变化。