类产碱假单胞菌谷氨酸脱氢酶的提纯、鉴定及某些特性的初步研究

摘要

从类产碱假单胞菌纯化出电泳纯的谷氨酸脱氢酶，用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳测得分子量为２９０ ｋＤ，亚基分子量为４７ ｋＤ，提示该酶为六聚体．该酶对ＮＡＤＰ（Ｈ）和底物均具有高度专一性，对谷氨酸、α－酮戊二酸及ＮＡＤＰ＋ 的Ｋｍ 值分别为：２８ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ、１．２ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ及０．０６３ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．用Ｈｉｌｌ作图法求得酶对ＮＨ＋４ 和ＮＡＤＰＨ 的［Ｓ］０．５分别为２４ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ和０．０３７ ｍ ｍ ｏｌ／Ｌ．最适反应温度为５０℃，催化氨化反应和脱氨反应的最适ｐＨ 分别为８．０和８．８，在热稳定性方面不及嗜热细菌的谷氨酸脱氢酶稳定．提纯的谷氨酸脱氢酶在低温（４℃）条件下，可在Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液中贮存半年以上，活力无明显下降，冷冻则可导致纯酶液迅速失活．氮源对菌体谷氨酸脱氢酶水平有显著影响．