人乳头状瘤病毒16型E6、E7基因转染的人宫颈上皮永生化细胞系的建立及鉴定

摘要

目的建立HPV16E6、E7基因转染的胎儿宫颈上皮永生化细胞系,为体外研究宫颈上皮HPV感染及其癌变机制提供模型。方法探索胎儿宫颈上皮细胞原代培养的方法,用逆转录病毒法将HPV16E6、E7基因转染原代培养的胎儿宫颈上皮细胞,筛选出稳定表达的细胞系,进行传代培养;应用RT-PCR检测细胞中HPV16E6、E7基因的表达,用绘制细胞生长曲线、形态学观察、软琼脂集落形成实验、流式细胞术、TranswellInsert体外侵袭实验和裸鼠成瘤实验等方法对永生化的胎儿宫颈上皮细胞进行鉴定。结果采用组织块培养法,选用Ker-SFM无血清培养基培养出纯度和生长状态良好的胎儿宫颈上皮原代细胞,可以利用高滴度的逆转录病毒作为载体,感染原代细胞,成功地建立一株永生化的胎儿宫颈上皮细胞系。永生化的细胞仍呈多边形,角蛋白阳性,仍维持上皮细胞表型,雌、孕激素受体阴性,染色体核型发生明显变化,但目前尚无软琼脂集落形成能力、不能穿过Matrigel基底膜,不能在裸鼠体内形成肿瘤。结论转染HPV16E6、E7基因能使胎儿宫颈上皮细胞永生化,永生化细胞仍维持上皮细胞表型,染色体核型发生明显变化,但尚未完全恶性转化。