乳腺癌细胞特异性MGA启动子的扩增及功能分析

摘要

目的探讨人乳腺球蛋白(mammaglobin A,MGA)基因启动子的乳腺肿瘤细胞特异性和调控元件,并验证MGA启动子载体系统在活体肿瘤组织中的表达活性。方法 PCR扩增5.6 kb大小的人MGA启动子片段,并在此基础上构建四个含有萤火虫荧光素酶报告基因的重组载体;瞬时转染到乳腺癌细胞系T47D和人胚肾细胞系HEK293T后,利用双荧光素酶报告基因体系,检测各个MGA启动子活性;稳定转染MGA重组载体到乳腺癌细胞系T47D(T47DEM),进行裸鼠皮下造瘤,活体成像检测报告基因活性。结果 (1)双增强子的启动子活性低于单增强子启动子(降低82%);(2)定点删除YY1结合元件后,启动子活性下降76.2%,乳腺肿瘤细胞特异性下降38.4%;(3)定点删除Nkx2.5后,启动子活性没有明显变化,但特异性降低31.9%;(4)细胞株T47DEM在体形成肿瘤后,表现出明显的报告基因活性。结论研究了两个增强子叠加和两个转录因子结合位点(YY1和Nkx2.5)对MGA启动子活性和特异性的影响;构建的细胞株(T47DEM)可以用于治疗乳腺癌药物的在体筛选。