通过生物素化标记分析细胞膜亚蛋白质组

摘要

细胞膜在许多基本生物学作用过程中扮演着重要角色,比如细胞-细胞相互作用、信号转导和物质运输.分析不同生理或病理状态细胞的膜蛋白的表达变化,有助于了解这些生物学过程以及发现新的诊断、治疗靶位.成功地进行膜蛋白分析最重要的是获得足够浓度与纯度的膜蛋白.这里报告一种分离高纯度膜蛋白的方法,主要包括三个步骤:(1)生物素化活细胞表面的膜蛋白,(2)链亲和素琼脂糖亲和吸附,(3)强烈的清洗条件去除非特异吸附的胞质蛋白.最后用化学方法洗脱生物素标记的膜蛋白进行双向电泳分离分析.用该方法制备了HeLa细胞的膜蛋白.免疫印迹结果表明,生物素标记的膜蛋白基本上都是低丰度蛋白.这样制备得到的膜蛋白双向电泳分离出2400多个蛋白质点,而且大多数点的亮度相近,分布得相对分散没有聚集成群.这种图谱非常便于比较分析找到差异蛋白.多次重复制备膜蛋白、电泳表明该方法的重复性和稳定性很好.