shRNA沉默MRE11表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FUDNA损伤修复的影响

摘要

目的:观察shMRE11沉默MRE11基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU DNA损伤修复功能的影响.方法:采用阳离子脂质体法将shMRE11干扰质粒转染BEL7402/5-FU细胞,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;Western blot检测细胞-H2AX蛋白表达;EdU法检测细胞DNA合成;MTT法检测细胞增殖情况.结果:Real-time PCR及Western blot检测结果显示MRE11 mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为78.0%、56.1%;Western blot检测-H2AX表达结果显示shMRE11实验组(1.04±0.056)较对照组(0.847±0.025)增加(P<0.05,t=10.78);EdU检测结果显示shMRE11实验组DNA合成率(38.819%±2.607%)较对照组(49.814%±1.227%)降低(P<0.05,t=-8.87);MTT细胞增殖检测结果显示转染72 h后shMRE11实验组(0.58±0.08)与对照组(0.87±0.09)相比细胞增殖速度减慢(P<0.05,t=-50.2).结论:shMRE11干扰质粒能够有效抑制B E L7402/5-F U细胞中M R E11表达,使细胞DNA损伤修复能力减弱、抑制细胞增殖.