传染性喉气管炎病毒中国王岗株tk基因的克隆及鉴定

摘要

以质粒pBluescript SK^+为载体克隆传染性喉气管炎病毒(ILTV）中国王岗株的DNA,构建了THind Ⅲ DNA文库。参考ILTV美国632株胸苷激酶（tk）基因的DNA序列,设计并合成了一对20bp长的引物;以ILTV中国王岗株DNA为模板,用PCR方法特异性地扩增出ILTV-713bp的tk DNA片段。用光敏生物素标记该713bp片段作为探针,通过斑点杂交从ILTV中国王岗株Hind Ⅲ DNA文库中筛选出4个含2.4kb外源片段的tk基因阳性重组质粒。经酶切分析、Southern杂交、PCR检测和部分限制酶酶谱分析表明:ILTV中国王岗株DNA 2.4 kb Hind Ⅲ 片段无论是片段大小还是酶切图谱均与美国632株完全相同,而且Southern杂交和PCR检测均为tk阳性,证明其中包含有完整的tk基因。本研究的目标是用克隆的tk基因进行体外缺失和重组,以构建毒力进一步降低的tk缺失减毒株,这些工作正在进行中。