微RNA-223下调心脏特异性新激酶基因表达对心肌细胞肥大的抑制效应

摘要

目的探讨微RNA-223(miRNA-223)通过下调心脏特异性新激酶(TNNI3K)基因表达对心肌细胞肥大的调控作用。方法选取原代培养新生大鼠心肌细胞,以内皮素-1(ET-1)人工诱导心肌细胞肥大。应用实时定量PCR测定miRNA-223的表达水平。通过化学修饰RNA模拟物转染实现miRNA-223的过表达,通过重组腺病毒转染实现TNNI3K的过表达。采用抗α-辅肌动蛋白(α-actinin)荧光染色法测量细胞大小,实时定量PCR检测心肌细胞肥大标志性基因的表达,Western印迹法测定TNNI3K和心肌肌钙蛋白I(cTnI)的蛋白表达,荧光素酶检测法判定miRNA-223与TNNI3K的3’端非编码区(3’-UTR)接合。结果 ET-1诱导的肥大心肌细胞的miRNA-223表达量显著低于正常心肌细胞(P0.05)。结论 miRNA-223通过直接下调TNNI3K基因表达抑制心肌细胞肥大,此调控效应与cTnI的磷酸化受限有关。